Kluczowa różnica - Trypsynizacja na ciepło i na zimno
Trypsynizacja na ciepło i na zimno to dwie metody stosowane w enzymatycznej dezagregacji komórek w hodowli komórek zwierzęcych. Kluczowa różnica między ciepłą i zimną trypsynizacją, jak sugerują nazwy, zależy od temperatury, w której trypsyna jest dodawana w celu dezagregacji komórkowej. Ciepła trypsynizacja zachodzi w warunkach wyższej temperatury (36,5 - 37 0 C), natomiast zimna trypsynizacja zachodzi w warunkach niskiej temperatury.
Podczas procesu hodowli komórek pierwotnych komórek zwierzęcych stosuje się trzy główne metody, które okazały się skuteczne. Te trzy metody obejmują mechaniczną dezagregację komórek, enzymatyczną dezagregację komórek i technikę pierwotnego eksplantatu. Enzymatyczna dezagregacja komórek prowadząca do izolacji komórek odbywa się za pomocą rozkładającego białka enzymu trypsyny. Dlatego proces ten nazywany jest trypsynizacją. Trypsynizację można przeprowadzić w dwóch różnych warunkach, mianowicie trypsynizacji na ciepło i trypsynizacji na zimno. Ciepła trypsynizacja to metoda traktowania komórek trypsyną w ciepłych warunkach w temperaturze 36,5 - 37 0C. Zimna trypsynizacja to proces obróbki trypsyną, który zachodzi w chłodniejszych warunkach, najlepiej w lodzie, przy zachowaniu bardzo niskich temperatur.
ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest trypsynizacja na ciepło
3. Co to jest trypsynizacja na zimno
4. Podobieństwa między trypsynizacją na ciepło i na zimno
5. Porównanie obok siebie - trypsynizacja na ciepło i na zimno w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie
Co to jest ciepła trypsynizacja?
Trypsynizację można przeprowadzić w celu zdezagregowania składników komórkowych w celu wyizolowania komórek w celu wytworzenia pierwotnej hodowli komórkowej. Trypsyna jest enzymem rozkładającym białka, a mieszanina enzymów stosowana do trypsynizacji może być surowym ekstraktem lub produktem oczyszczonym. Uważa się, że surowy ekstrakt jest bardziej skuteczny w lizie białek i rozpadzie komórek, ponieważ zawiera inne enzymy rozkładające.
Ciepła trypsynizacja jest najczęściej stosowaną enzymatyczną metodą dezagregacji komórek, która zachodzi w warunkach wyższej temperatury. Przed zabiegiem trypsynizacją żądaną tkankę kroi się na mniejsze kawałki. Ułatwia łatwy proces dezagregacji. Pociętą tkankę następnie przemywa się w specjalnym podłożu znanym jako podłoże Dissection Basal Salt.
Po zakończeniu etapu przemywania komórki transformuje się do kolby zawierającej aktywny enzym, którym jest trypsyna. Ponieważ technika ta wymaga ciepłego protokołu trypsynizacji, trypsynę umieszcza się w temperaturze około 37 ° C na około cztery godziny.
Rysunek 01: Trypsyna
Zawartość jest mieszana i wstrząsana przy użyciu metod wirowania w celu ułatwienia protokołu i przyspieszenia procesu dezagregacji. Po osiągnięciu zalecanego czasu komórki można pobrać z supernatantu. Komórki pochodzące z supernatantu są następnie inkubowane w określonej temperaturze i czasie.
Co to jest trypsynizacja na zimno?
Zimna trypsynizacja to inny rodzaj trypsynizacji, który zachodzi w zimnych warunkach. W tej technice posiekane i przemyte komórki są umieszczane w fiolkach na lodzie, a następnie nasączane trypsyną. Okres moczenia jest znacznie dłuższy - około 6-24 godzin.
Po zakończeniu procedury namaczania trypsynę usuwa się z lizatu komórkowego, a fragmenty tkanki dalej inkubuje w 37 ° C przez około 20 - 30 minut. Dezagregacja komórek jest spowodowana wielokrotnym pipetowaniem mieszaniny tkankowej. Pozwoli to komórkom oddzielić się od błony i dotrzeć do supernatantu. Gdy komórki znajdą się w supernatancie, są inkubowane i hodowane w żądanej temperaturze i przez określony czas.
Metoda zimnej trypsynizacji ma kilka zalet
- Wyższa wydajność żywotnych komórek, ponieważ uszkodzenie komórek jest zminimalizowane. Uszkodzenie komórek jest zminimalizowane poprzez niestosowanie etapów wirowania.
- Bardzo wygodna metoda.
- Mniej pracochłonne.
Głównym ograniczeniem metody trypsynizacji na zimno jest to, że w jednym przypadku nie można zastosować dużych ilości.
Jakie są podobieństwa między trypsynizacją na ciepło i na zimno?
- Zarówno proces trypsynizacji na ciepło, jak i na zimno wykorzystują enzym trypsynę do dezagregacji komórek.
- W procedurach hodowli komórkowych do dezagregacji komórek stosuje się procesy trypsynizacji na ciepło i na zimno.
- W obu procedurach traktowania trypsynizacją na ciepło i na zimno, komórki pochodzą z supernatantu.
Jaka jest różnica między trypsynizacją na ciepło i na zimno?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Trypsynizacja na ciepło i na zimno |
|
| Ciepła trypsynizacja to metoda traktowania komórek trypsyną w ciepłych warunkach w temperaturze 36,5 - 37 0. | Zimna trypsynizacja to proces obróbki trypsyną, który odbywa się w chłodniejszych warunkach, najlepiej w lodzie, przy zachowaniu bardzo niskich temperatur. |
| Protokół | |
| Pocięte fragmenty tkanki są utrzymywane w temperaturze 37 ° C przez cały czas trwania procedury. | Pocięte kawałki tkanki są najpierw utrzymywane w temperaturze lodu zimno, a następnie utrzymywano w temperaturze 37 0. |
| Temperatura | |
| Ciepła trypsynizacja zachodzi przy 36,5 - 37 0 | Zimna trypsynizacja zachodzi w lodowatych temperaturach. |
| Pochłonięty czas | |
| Krótszy czas potrzebny na cały proces (około 4 godziny) ciepłej trypsynizacji. | Do trypsynizacji na zimno wymagany jest dłuższy czas (około 6-24 godzin). |
| Wydajność żywotnych komórek | |
| Niska przy ciepłej trypsynizacji. | Wysoka zimna trypsynizacja. |
| Zastosowanie wirowania | |
| Odwirowanie jest wymagane do dezagregacji komórek podczas ciepłej trypsynizacji. | Wirowanie nie jest wymagane przy zimnej trypsynizacji. |
| Początkowa ilość tkanki do trypsynizacji | |
| Podczas ciepłej trypsynizacji można użyć większej ilości tkanki. | Mniejsza ilość tkanki może być użyta podczas zimnej trypsynizacji. |
| Cell Damage | |
| Wysoka z powodu wirowania podczas ciepłej trypsynizacji. | Mniej z powodu zimnej trypsynizacji. |
Podsumowanie - Trypsynizacja na ciepło kontra zimno
Trypsynizacja to metoda wykorzystująca rozkładający białko enzym trypsynę do dezagregacji i przygotowania pierwotnych hodowli komórkowych podczas procesu hodowli komórkowej. Istnieją dwie główne techniki trypsynizacji oparte na temperaturach stosowanych podczas zabiegu. Są ciepłą i zimną trypsynizacją. Ciepłą trypsynizację przeprowadza się w 37 ° C, podczas gdy zimną trypsynizację przeprowadza się w lodowatych warunkach. Chociaż zimna trypsynizacja zajmuje więcej czasu, mówi się, że daje wyższą wydajność żywotnych komórek. Wynika to z faktu, że uszkodzenie komórek jest zminimalizowane podczas zimnej trypsynizacji, ponieważ nie stosuje się energicznych etapów wirowania. Na tym polega różnica między trypsynizacją na ciepło i na zimno.
