Kluczowa różnica - Immunofluorescencja a immunohistochemia
Diagnostyka chorób wykorzystująca metody biologii molekularnej stała się wyłaniającą się dziedziną technologii laboratoriów klinicznych. Obejmuje wszystkie testy i metody identyfikacji choroby i zrozumienia przyczyny choroby poprzez analizę DNA, RNA lub wyrażonych białek w organizmie. Szybki postęp w diagnostyce molekularnej umożliwił prowadzenie podstawowych badań nad chorobami zakaźnymi i niezakaźnymi. Są one używane do określania zmian w sekwencji lub poziomach ekspresji kluczowych genów lub białek zaangażowanych w chorobę. Immunofluorescencja (IF) i immunohistochemia (IHC) to dwie tak szeroko stosowane techniki w biologii raka. IF to rodzaj IHC, w którym metoda wykrywania fluorescencji jest stosowana do analizy przeciwciał monoklonalnych i poliklonalnych, podczas gdy IHC wykorzystuje metody chemiczne do wykrywania przeciwciał monoklonalnych i poliklonalnych. To jest kluczowa różnica między IF i IHC.
ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowe różnice
2. Czym jest immunofluorescencja
3. Czym jest immunohistochemia
4. Podobieństwa między immunofluorescencją a immunohistochemią
5. Porównanie obok siebie - immunofluorescencja a immunohistochemia w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie
Co to jest immunofluorescencja (IF)?
Immunofluorescencja to technika wykrywania, w której przeciwciała stosowane w teście są znakowane przy użyciu barwników fluorescencyjnych lub białek fluorescencyjnych w celu wykrywania. Znakowane przeciwciała drugorzędowe mogą dawać niepożądane sygnały tła; dlatego też technika IF opiera się obecnie na znakowaniu samego przeciwciała pierwszorzędowego w celu uniknięcia niepożądanych sygnałów podczas wykrywania. Dzięki tej technice zapobiega się niespecyficznemu wiązaniu między przeciwciałem pierwszorzędowym i drugorzędowym i jest ono szybsze, ponieważ nie obejmuje drugiego etapu inkubacji. Poprawiona zostaje również jakość danych.
Rysunek 01: Podwójne barwienie immunofluorescencyjne dla BrdU, NeuN i GFAP
Fluorochromy lub barwniki fluorescencyjne to związki, które mogą absorbować promieniowanie, korzystnie wzbudzone promieniowanie ultrafioletowe. Gdy cząsteczki osiągają stan podstawowy ze stanu wzbudzonego, emitują promieniowanie, które jest wychwytywane i wykrywane przez detektor, tworząc widmo. Bardzo ważne jest, aby znacznik fluorescencyjny był kompatybilny i stabilny dla danej reakcji i powinien być odpowiednio skoniugowany z przeciwciałem w celu uzyskania dokładnych wyników. Jednym z najczęściej stosowanych fluorochromów jest izotiocyjanian fluoresceiny (FITC), który ma kolor zielony, z pikami absorpcyjnymi i emisyjnymi o długościach fali odpowiednio 490 nm i 520 nm. Rodamina, inny środek stosowany w IF, ma kolor czerwony i ma wyraźne szczytowe długości fal absorpcji i emisji 553 nm i 627 nm.
Co to jest immunohistochemia (IHC)?
IHC to molekularna metoda testowania stosowana w celu identyfikacji i potwierdzenia obecności antygenu w komórce docelowej. Komórka docelowa może być cząstką zakaźną, patogenem drobnoustrojów lub złośliwą komórką nowotworową. IHC wykorzystuje przeciwciała monoklonalne i poliklonalne do określenia obecności antygenów na powierzchni komórek docelowych. Technika opiera się na wiązaniu antygenu z przeciwciałem. Marker wykrywający jest sprzężony z tymi przeciwciałami w celu wykrycia obecności lub braku określonego antygenu. Markery te mogą być markerami chemicznymi, takimi jak enzymy, przeciwciała znakowane fluorescencyjnie lub przeciwciała znakowane radioaktywnie.
Rysunek 02: Wycinek z mózgu myszy wybarwiony metodą immunohistochemii
Najpopularniejszym zastosowaniem IHC w biologii komórek nowotworowych jest identyfikacja obecności guzów złośliwych, ale jest ona również wykorzystywana do wykrywania chorób zakaźnych.
Jakie są podobieństwa między immunofluorescencją a immunohistochemią?
- Immunofluorescencja i Immunohistochemia zachodzą w warunkach in vitro.
- Obie techniki są oparte na antygenie-przeciwciele
- Obie są bardzo szybkimi technikami.
- Wyniki technik są powtarzalne.
- Oba poprawiły jakość danych.
- Techniki te wykorzystywane są w diagnostyce chorób nowotworowych i zakaźnych.
Jaka jest różnica między immunofluorescencją a immunohistochemią?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Immunofluorescencja a immunohistochemia |
|
| IF to technika wykrywania, w której przeciwciała stosowane w teście są znakowane przy użyciu barwników fluorescencyjnych lub białek fluorescencyjnych do wykrywania. | IHC to technika wykrywania, w której przeciwciała używane w teście są znakowane przy użyciu substancji chemicznych lub pierwiastków radioaktywnych do wykrywania. |
| Precyzja | |
| Dokładność jest wyższa w technice IF w porównaniu z IHC. | Dokładność jest niższa w IHC. |
| Specyficzność | |
| JEŚLI jest bardziej szczegółowe. | IHC jest mniej szczegółowy. |
Podsumowanie - Immunofluorescencja a immunohistochemia
Mechanizmy molekularne spowodowały wiele zmian w medycynie, dając początek zaawansowanym metodom badań molekularnych, które przyniosły rewolucję w dziedzinie diagnostyki. Wynalazki te doprowadziły do szybkiej i dokładnej identyfikacji i potwierdzenia choroby, umożliwiając tym samym skuteczne podawanie i produkcję leków. Techniki te są również wykorzystywane w farmakologii w celu znalezienia celów leków i potwierdzenia właściwości farmakokinetycznych leku podczas metabolizmu leku. IF i IHC to dwie metody diagnostyczne oparte na koncepcji wiązania antygenu i przeciwciała, chociaż sposoby wykrywania w obu technikach różnią się. IF wykorzystuje zasadę fluorescencji do wykrywania antygenu, a IHC wykorzystuje koncepcję koniugacji chemicznej do wykrywania antygenu. Na tym polega różnica między IF i IHC.
Pobierz wersję PDF Immunofluorescence vs Immunohistochemistry
Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej w trybie offline, zgodnie z notą cytowania. Pobierz wersję PDF tutaj Różnica między immunofluorescencją a immunohistochemią.
