Różnica Między Benzonazą A DNazą

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Ostatnio zmodyfikowany: 2023-12-16 08:41

Kluczowa różnica - benzonaza a DNaza

Degradacja kwasów nukleinowych jest ważna dla wielu technik biologii molekularnej. Jest szeroko stosowany w technologii rekombinacji DNA, aby pozbyć się niechcianych fragmentów DNA i RNA. Enzymy rozkładające kwas nukleinowy nazywane są nukleazami i mogą być różnego typu w zależności od wymaganej funkcji. Nukleazy degradujące DNA są znane jako DNazy, podczas gdy te, które degradują RNA, to znane RNazy. Enzymy te są najczęściej używane w eksperymentach in vitro, w których przeprowadza się testy molekularne in vitro w celu wyizolowania czystego DNA, RNA lub białek. Benzonazy to rodzaj nukleaz, które degradują zarówno DNA, jak i RNA, podczas gdy DNazy degradują tylko DNA. To jest kluczowa różnica między benzonazą a DNazą.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowe różnice

2. Co to jest benzonaza

3. Co to jest DNaza

4. Podobieństwa między benzonazą a DNazą

5. Porównanie obok siebie - benzonaza i DNaza w formie tabelarycznej

6. Podsumowanie

Co to jest benzonaza?

Benzonaza jest endonukleazą wytwarzaną metodami inżynierii genetycznej z Serratia marcescens. Enzym ten jest wytwarzany w gospodarzach E. coli na skalę przemysłową. Benzonaza jest zdolna do cięcia dwuniciowego DNA, liniowego DNA, kolistego DNA i jednoniciowego RNA. Zatem benzonaza ma znaczenie handlowe. Enzym benzonaza jest dimerem białka, który ma 245 identycznych aminokwasów, podjednostek ~ 30 kDa z dwoma niezbędnymi wiązaniami disiarczkowymi. Benzonaza rozszczepia kwasy nukleinowe na swoim końcu 5 'i daje fragmenty z wolnymi końcami 5'. Benzonaza może ciąć kwasy nukleinowe w dowolnej sekwencji, ale preferuje regiony bogate w GC.

Benzonazę przechowuje się w -20 ⁰ C. Stwierdzono, że optymalne pH dla aktywności enzymu wynosi 8,0 - 9,2. Zastosowania benzonazy obejmują przygotowanie próbek do elektroforezy żelowej białek 2D, w których benzonaza usuwa związane kwasy nukleinowe i usuwanie zanieczyszczeń kwasami nukleinowymi z preparatów rekombinowanych białek. Służy również do zmniejszania lepkości ekstraktów białkowych i zapobiegania zlepianiu się komórek w mieszaninie komórek.

Co to jest DNaza?

DNaza jest nukleazą, enzymem hydrolitycznym, który jest zdolny do cięcia jedynie dwuniciowego DNA. Istnieją dwa główne typy DNaz: DNaza I i DNaza II. DNaza I uczestniczy w rozszczepianiu dwuniciowego DNA w celu wytworzenia polinukleotydów z wolnymi końcami 5 '. DNaza II bierze udział w cięciu dwuniciowego DNA w celu wytworzenia nici polinukleotydowych z wolnymi końcami lub występami 3 '.

DNaza I

DNaza I funkcjonuje przy optymalnym pH między 7,0 - 8,0. Aktywność enzymu zależy od wielu kofaktorów jonowych, do których należą Ca ²⁺, Mg ²⁺ czy Mn ²⁺. Aktywność Mg ²⁺ i Mn ²⁺ decyduje o funkcji DNazy I. W obecności Mg ²⁺, DNaza I rozszczepia każdą nić dsDNA niezależnie. Odbywa się to w sposób losowy. W przeciwieństwie do tego, w obecności Mn ²⁺ enzym rozszczepia obie nici DNA w przybliżeniu w tym samym miejscu. To cięcie spowoduje powstanie dwóch typów fragmentów DNA; jeden typ z tępymi końcami i inny typ z jednym lub dwoma wystającymi fragmentami nukleotydów.

Rysunek 02: DNaza

DNaza II

DNaza II działa przy optymalnym pH 4,5-5,0, a do jej aktywności wymagane są dwuwartościowe jony metali, podobnie jak DNaza I. Wiadomo, że mechanizm działania DNazy II składa się z trzech głównych etapów.

1. W szkielecie DNA indukowanych jest wiele pęknięć pojedynczej nici.
2. Wytwarzane są rozpuszczalne w kwasach nukleotydy i oligonukleotydy.
3. W ostatniej fazie występuje nieliniowe przesunięcie hiperchromiczne.

Do głównych inhibitorów enzymu DNazy należą chelatory metali, metale przejściowe i substancje chemiczne, takie jak dodecylosiarczan sodu i β-merkaptoetanol.

Główne zastosowania DNazy obejmują przygotowanie wolnych od DNA ekstraktów RNA i białek oraz usuwanie matrycowego DNA podczas eksperymentów transkrypcyjnych in vitro.

Jakie są podobieństwa między benzonazą a DNazą?

• Oba są enzymami hydrolitycznymi.
• Obie są nukleazami.
• Oba uczestniczą poprzez rozszczepienie wiązań fosfodiestrowych kwasów nukleinowych.
• Obie wymagają optymalnego pH i temperatury przechowywania, aby utrzymać aktywność enzymu.
• Inhibitory enzymów obejmują środki chelatujące, metale przejściowe i detergenty.
• Zastosowania koncentrują się głównie na uzyskiwaniu ekstraktów DNA, RNA i białek o wysokiej czystości.
• Oba enzymy można wyprodukować za pomocą inżynierii genetycznej.

Jaka jest różnica między benzonazą a DNazą?

Porównaj środek artykułu przed tabelą

Benzonaza vs DNaza
Benzonaza jest enzymem zdolnym do rozszczepiania dwuniciowego DNA, liniowego DNA, kolistego DNA i RNA.	DNaza jest enzymem zdolnym do rozszczepiania dwuniciowego DNA.
Substrat dla enzymu
Zarówno DNA, jak i RNA są substratami dla benzonazy.	DNA jest substratem dla DNazy.
Struktura
Optymalny zakres pH benzonazy wynosi 7,0 -8,0	Optymalne zakresy pH DNazy I to 7,0 - 8,0, a DNazy II 4,5 - 5,0.

Podsumowanie - Benzonaza vs DNaza

Enzymy nukleazy są szeroko stosowane w różnych procedurach eksperymentalnych w zakresie biologii molekularnej i inżynierii genetycznej. Benzonaza i DNaza to dwa rodzaje nukleaz. Benzonaza bierze udział w degradacji zarówno DNA, jak i RNA, podczas gdy DNaza bierze udział w rozszczepianiu dwuniciowego DNA. To jest podstawowa różnica między benzonazą a DNazą. Obecnie oba te typy nukleaz są wytwarzane za pomocą technologii rekombinacji DNA, która zapewnia enzymy wyższej jakości, zoptymalizowane pod kątem maksymalnej produkcji.

Pobierz wersję PDF Benzonase vs DNase

Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej w trybie offline, zgodnie z notą cytowania. Proszę pobrać wersję PDF tutaj Różnica między benzonazą a DNazą