Kluczowa różnica - transfekcja przejściowa vs stabilna
Transfekcja to proces, który bierze udział w transferze genów komórek eukariotycznych przy użyciu metod chemicznych lub fizycznych. Transfekcję można podzielić na dwa główne typy, zwane przejściową transfekcją i stabilną transfekcją. Podczas przejściowej transfekcji gen będący przedmiotem zainteresowania nie integruje się z genomem gospodarza i jest ekspresjonowany czasowo w gospodarzu przez krótki okres, podczas gdy w stabilnej transfekcji gen będący przedmiotem zainteresowania integruje się z genomem gospodarza i utrzymuje się przez długi czas przez kilka pokoleń. To jest kluczowa różnica między przejściową i stabilną transfekcją. W obu przypadkach transfekcja kończy się sukcesem i następuje ekspresja genów.
SPIS TREŚCI
1. Przegląd i kluczowe różnice
2. Co to jest transfekcja przejściowa
3. Co to jest transfekcja stabilna
4. Porównanie obok siebie - transfekcja przejściowa vs stabilna
5. Podsumowanie
Co to jest przejściowa transfekcja?
Transfekcja jest ważnym narzędziem do wstawiania genów do komórek eukariotycznych. Spośród dwóch typów transfekcji, przejściowa transfekcja jest powszechnym sposobem transferu genów. Za pomocą wektora obce geny są transformowane w komórkach gospodarza. Gdy obcy DNA dostanie się do komórki gospodarza, ma dwie możliwości. Może albo zintegrować się z genomem gospodarza i replikować, albo pozostać wewnątrz bez integracji z genomem. Przejściowa transfekcja wykazuje tymczasową ekspresję wstawionych genów bez integracji z genomem gospodarza. Geny wyrażają i wytwarzają zakodowane białko do momentu podziału komórki. Jednak ze względu na niemożność integracji nie może się powielać i wchodzić w przyszłe pokolenia. Ten typ transfekcji jest skuteczny przez krótki czas. Podczas podziału komórki lub z powodu innych czynników obcy DNA ulega degradacji. Przejściowa transfekcja jest pokazana, gdy obcy DNA ma postać wysoce zwiniętego DNA.
Rysunek 01: Przejściowa transfekcja
Co to jest stabilna transfekcja?
Stabilna transfekcja wskazuje na udaną integrację obcego genu do genomu gospodarza. Gdy obcy DNA dostanie się do komórki gospodarza, część obcego DNA integruje się z genomem gospodarza i staje się jego częścią. W związku z tym obcy DNA również replikuje się i przechodzi do przyszłych pokoleń, gdy replikuje genom gospodarza. Ten typ transfekcji jest złożony i rzadki. Jednak ze względu na stabilną transfekcję do genomu cecha ta utrzymuje się przez dłuższy okres kilku pokoleń.
Stabilna transfekcja jest trudnym procesem i wymaga skutecznego dostarczania DNA i pozyskania obcego DNA przez komórkę do jego genomu. Stąd liniowy DNA sprzyja stabilnej transfekcji niż kolisty DNA. Jednakże stabilny poziom transfekcji przybliżeniu 10 4 transformowanych komórek. Stabilną transfekcję można zaobserwować przez kotransfomację markera selekcyjnego i przeprowadzenie sztucznej selekcji na pożywce.
Rycina 02: Stabilna transfekcja
Jaka jest różnica między przejściową a stabilną transfekcją?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Transfekcja przejściowa vs stabilna |
|
| Obce DNA nie integruje się z genomem gospodarza. | Obce DNA integruje się z genomem gospodarza i staje się jego częścią. |
| Replikacja w hoście | |
| Geny transfekowane przejściowo nie replikują się w gospodarzu. Dlatego geny nie są przekazywane następnym pokoleniom. | Geny są replikowane w gospodarzu i przekazywane przyszłym pokoleniom. |
| Czas trwania ekspresji genu | |
| Geny są wyrażane przez określony czas, a następnie ulegają zniszczeniu. | Geny stają się częścią genomu i przez długi czas ulegają ekspresji w pokoleniu. |
| Posługiwać się | |
| Jest to przydatne do badania skutków krótkoterminowej ekspresji genów lub produktów genowych. | Jest to przydatne do badania skutków ekspresji genów w długim okresie. |
| Wykrywanie transfekcji | |
| Geny ulegają ekspresji i można je łatwo wykryć poprzez wstawienie genu reporterowego. | Stabilną transfekcję można łatwo wykryć przez wstawienie markera selekcyjnego i selekcję poprzez sztuczną selekcję na pożywkach. |
| Występowanie i proces | |
| Przejściowa transfekcja jest powszechna i nie jest skomplikowana do wykonania. | Stabilna transfekcja jest rzadka i skomplikowana do wykonania. |
| Charakter DNA | |
| Wysoko superskręcone DNA jest odpowiednie do przejściowej transfekcji. | Liniowe DNA są odpowiednie do stabilnej transfekcji. |
| Aplikacje | |
| Służy do badań knockdownu lub wyciszania genów za pomocą hamujących RNA, produkcji białek na małą skalę | Służy do produkcji białek na dużą skalę, długoterminowych badań farmakologicznych, terapii genowej, badań nad mechanizmami długoterminowej regulacji genetycznej |
Podsumowanie - Transfekcja przejściowa vs stabilna
Przejściowe i stabilne transfekcje to dwa rodzaje transfekcji pokazane podczas przenoszenia genów do komórek eukariotycznych przez systemy niewirusowe. Transformowany obcy DNA nie integruje się z genomem gospodarza podczas przejściowej transfekcji, podczas gdy integruje się z genomem gospodarza w stabilnej transfekcji. Wykazano, że kolisty zwinięty DNA wykazuje przejściową transfekcję, podczas gdy liniowy DNA preferuje stabilną transfekcję. Taka jest różnica między przejściową a stabilną transfekcją. Jednak przejściowa transfekcja jest bardziej powszechna i łatwiejsza w porównaniu do stabilnej transfekcji. Ale wybór jednego z dwóch zależy od celu transferu genów i czasu trwania projektu badawczego.
