Kluczowa różnica - strona SDS vs Western Blot
Western blot to technika, która wykrywa określone białko w próbce białka. Technika ta jest wykonywana poprzez kilka kluczowych etapów: elektroforeza żelowa, blotting i hybrydyzacja. Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS Page) to rodzaj techniki elektroforezy żelowej, która służy do rozdzielania białek według ich wielkości (masy cząsteczkowej). Western blot to specjalny arkusz błony do blottingu, który służy do przenoszenia tego samego wzoru białek na stronie SDS. Kluczowa różnica między SDS Page i western blot polega na tym, że SDS Page umożliwia rozdzielanie białek w mieszaninie, podczas gdy western blot umożliwia wykrywanie i oznaczanie ilościowe konkretnego białka z mieszaniny. Oba są przydatne w badaniach analizy białek.
SPIS TREŚCI
1. Przegląd i kluczowe różnice
2. Co to jest SDS Strona
3. Co to jest Western Blot
4. Bezpośrednie porównanie - SDS vs Western Blot
5. Podsumowanie
Co to jest strona SDS?
SDS Page jest techniką elektroforezy żelowej stosowaną do rozdziału białek. Jest powszechnie stosowany w biochemii, genetyce, kryminalistyce i biologii molekularnej. Po wyekstrahowaniu białek z próbki są one przenoszone na żel składający się z SDS i poliakryloamidu. SDS jest anionowym detergentem używanym do linearyzacji białek (denaturacji białek) oraz do nadawania linearyzowanym białkom ładunku ujemnego proporcjonalnie do ich masy cząsteczkowej. Poliakrylamid staje się stałym nośnikiem żelu. Zdenaturowane białka o ładunku ujemnym migrują przez żel w kierunku dodatniego końca aparatu. W zależności od wielkości białek, prędkości migracji różnią się między białkami i następuje separacja. Dlatego strona SDS jest przydatna do rozdzielania poszczególnych białek na podstawie ich rozmiarów.
Przygotowanie żelu poliakrylamidowego do frakcjonowania białek jest kluczowym krokiem na stronie SDS. Prawidłowe stężenie poliakryloamidu oraz rodzaj zastosowanego środka sieciującego silnie wpływają na właściwości fizyczne żelu, co powoduje faktyczne rozdzielenie poszczególnych białek. Aby zapewnić skuteczną separację, należy odpowiednio dostosować wielkość porów w żelu. Jednak SDS Page jest uważane za technikę rozdzielania białek o wysokiej rozdzielczości.
Technika SDS Page ma poważne ograniczenie w analizie białek. Ponieważ SDS denaturuje białka przed separacją, nie pozwala na wykrycie aktywności enzymatycznej, interakcji wiązania białek, kofaktorów białek itp.
Rysunek 01: Strona SDS
Co to jest Western Blot?
Technika Western blot umożliwia wykrycie określonego białka z mieszaniny białek oraz pomiar ilości i masy cząsteczkowej białka. Western blot to membrana używana podczas procedury blottingu do uzyskania lustrzanego odbicia wzorów białek w żelu poliakrylamidowym SDS. Membrana używana do western blot jest w większości wykonana z nitrocelulozy lub polifluorku winylidenu (PVDF). Błonę z przeniesionym białkiem można wykorzystać do identyfikacji pożądanego białka. Wymaga wysokiej jakości przeciwciała do wykrywania żądanego białka przez hybrydyzację. Przeciwciało wiąże się ze swoim specyficznym antygenem i ujawnia obecność pożądanego antygenu, którym jest białko.
Przeniesienie białek z żelu poliakryloamidowego SDS do western blot przeprowadza się za pomocą elektroblottingu. Jest to skuteczna i szybka metoda, która powoduje elektroforezę białek z żelu i przejście na błonę nitrocelulozową (western blot).
Rysunek 02: Western Blot
Jaka jest różnica między SDS Page i Western Blot?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Strona SDS vs Western Blot |
|
| SDS Page to technika elektroforezy żelowej. | Western blot to technika wykonywana na membranie w celu wykrycia określonego białka z mieszaniny. |
| Posługiwać się | |
| Strona SDS umożliwia rozdzielenie białek według ich wielkości. | Western blot umożliwia przenoszenie białek na żelu strony SDS bez zmiany jego wzoru i umożliwia hybrydyzację ze specyficznymi przeciwciałami. |
| Niedogodności | |
| Wadą tej techniki jest denaturacja białek, wysoki koszt i obecność neurotoksyn. | Ta technika jest czasochłonna i wymaga dobrego, doświadczonego osobistego i określonych kontrolowanych warunków. |
Podsumowanie - Strona SDS a Western Blot
Strona SDS i western blot to dwie metody stosowane w analizie białek. Strona SDS umożliwia łatwe rozdzielanie białek na żelu w zależności od ich masy cząsteczkowej. Western blot pomaga potwierdzić obecność i ilość określonego białka poprzez hybrydyzację ze specyficznymi przeciwciałami. To jest różnica między SDS Page i western blot.
