Różnica Między Ligazą DNA T4 I T7

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Ostatnio zmodyfikowany: 2023-12-16 08:41

Kluczowa różnica - ligaza DNA T4 vs T7

Ligaza DNA jest ważnym enzymem stosowanym w technikach biologii molekularnej. Działa jak klej molekularny do łączenia nukleotydów poprzez tworzenie wiązań fosfodiestrowych między nukleotydami. Wiązania fosfodiestrowe powstają między hydroksylowym końcem 3 'reszty cukrowej a końcową grupą fosforanową 5'. Ligaza DNA jest niezbędna w procesie replikacji, aby połączyć fragmenty Okazaki opóźnionej nici oraz podczas mechanizmów naprawy DNA i eksperymentów z klonowaniem in vitro, aby połączyć pożądany gen będący przedmiotem zainteresowania z genomem wektora. Istnieją dwie główne ligazy DNA używane obecnie przez biologów molekularnych: ligazy DNA T4 i T7. Ligaza DNA T4 jest jednym z pierwszych enzymów izolowanych z bakteriofaga T4. Ligaza DNA T7, która jest mniejszym białkiem, jest enzymem izolowanym z bakteriofaga T7. To jest kluczowa różnica między ligazami DNA T4 i T7.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowa różnica

2. Jakie jest działanie ligazy DNA

3. Co to jest ligaza DNA T4

4. Co to jest ligaza DNA T7

4. Podobieństwa między ligazą DNA T4 i T7

5. Porównanie obok siebie - ligaza DNA T4 i T7 w formie tabelarycznej

6. Podsumowanie

Jakie jest działanie ligazy DNA?

Ligacja DNA zachodzi w trójetapowej reakcji. Pierwszym krokiem jest nukleofilowy atak na alfa-fosfor w ATP, generujący kowalencyjny związek pośredni enzym-adenylan, w którym AMP jest połączony z azotem lizyny w końcowym łańcuchu bocznym. W drugim etapie następuje atak nukleofilowy na fosfor enzymu adenylanu przez substrat DNA zakończony 5'-fosforanem, uwalniając lizynę i tworząc adenylan DNA. Na ostatnim etapie adenylan DNA jest atakowany przez 3'-OH innej nici DNA, uwalniając AMP i łącząc się z polinukleotydami.

Co to jest ligaza DNA T4?

Ligaza T4 była pierwszą ligazą wyodrębnioną i zidentyfikowaną przez Meselsona, Weigle'a i Kellenbergera oraz pierwszą kiedykolwiek wyprodukowaną komercyjnie ligazą. Ligaza DNA T4 jest enzymem zależnym od ATP, który katalizuje tworzenie wiązania fosfodiestrowego. Jest to pojedynczy łańcuch polipeptydowy o 487 resztach aminokwasowych i masie cząsteczkowej około 77 kDa. Optymalne pH dla jego aktywności mieści się w przedziale 7,5 - 8.

Rysunek 01: Ligaza DNA T4

Ligaza DNA T4, jak sugeruje jej nazwa, jest obecna w bakteriofagu T4 i została wyizolowana, gdy fag wyprodukował enzym po zakażeniu E. coli. Enzym liguje dwuniciowe dupleksy DNA z tępymi końcami, a fragmenty, które mają być związane, powinny znajdować się blisko siebie.

Co to jest ligaza DNA T7?

Ligaza T7 to białko o masie 41 kDa wytwarzane przez bakteriofaga T7 i jest izolowane przez zakażenie komórek E. coli. Główną funkcją ligazy T7 jest ligacja dupleksów DNA przez wiązania fosfodiestrowe i łączenie pobliskich fragmentów DNA podczas eksperymentów z klonowaniem. Optymalne pH dla ligazy DNA T7 mieści się w zakresie 7,0 - 7,2. Ligaza T7 jest zależna od ATP. Ligazy DNA T7 są również zdolne do hybrydyzacji hybryd DNA i RNA, powodując powstawanie nieprawidłowych konformacji podczas transkrypcji; jednak zjawisko to jest nadal badane w badaniach in vitro.

Jakie są podobieństwa między ligazą DNA T4 i T7?

• Ligaza DNA T4 i T7 bierze udział w reakcji ligacji poprzez łączenie dupleksów DNA poprzez tworzenie wiązania fosfodiestrowego pomiędzy końcem 3 'OH i końcem fosforanowym 5' fragmentu DNA.
• Oba enzymy łączą dupleksy DNA o tępych końcach, które są blisko siebie.
• Oba enzymy są zależne od ATP.
• Te enzymy są izolowane przez zakażenie komórek E. coli określonym bakteriofagiem.

• Zastosowania obu enzymów obejmują:

  • Klonowanie molekularne - w celu ligacji interesującego genu do wektora
  • Naprawa DNA - w celu naprawy dwuniciowych nisz
  • Replikacja DNA in vitro
  • Reakcja łańcuchowa ligazy

Jaka jest różnica między ligazą DNA T4 i T7?

Porównaj środek artykułu przed tabelą

Ligaza DNA T4 vs T7
Ligaza DNA T4 typu ligazy DNA izolowanej z bakteriofaga T4 i bierze udział w ligowaniu sąsiednich fragmentów DNA poprzez tworzenie wiązań fosfodiestrowych.	Ligaza DNA T7 typu ligazy DNA izolowanej z bakteriofaga T7 i bierze udział w ligowaniu sąsiednich fragmentów DNA poprzez tworzenie wiązań fosfodiestrowych.
Wielkość białka
Wielkość ligazy DNA T4 jest 77 kDa - większa w porównaniu do ligazy DNA T7.	Wielkość ligazy DNA T7 wynosi 41 kDa.
Optymalne pH
Zakres pH, który działa ligaza DNA T4 wynosi 7,5 - 8,0.	Zakres pH, który działa ligaza DNA T7 wynosi 7,0 - 7,2.

Podsumowanie - Ligaza DNA T4 vs T7

Ligazy DNA to ważna klasa enzymów zaangażowanych w klonowanie molekularne w celu wytworzenia rekombinowanych cząsteczek DNA zawierających interesujący gen. Reakcja ligacji to reakcja wykorzystująca energię i obecnie prowadzone są nowatorskie badania naukowe mające na celu poprawę dokładności poprzez modulowanie dostępnych ligaz. Ligazy DNA T4 i T7 to dwa typy ważnych enzymów ligazy DNA stosowanych w technikach biologii molekularnej. Ligaza DNA T7 jest również wynikiem badań opartych na pierwotnej ligazie wyizolowanej z bakterii E. coli zakażonych T4. T7 przedstawia większą wydajność i dokładność w wykonywaniu swojej funkcji ze względu na mniejszy rozmiar. To jest różnica między ligazą T4 i T7.

Pobierz wersję PDF ligazy DNA T4 vs T7

Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej w trybie offline, zgodnie z notami cytowania. Proszę pobrać wersję PDF tutaj Różnica między ligazą T4 i T7.