Kluczowa różnica - polimeraza fuzja a taq
Polimerazy DNA są szeroko stosowanymi enzymami w technikach biologii molekularnej i są również naturalnie obecne we wszystkich organizmach poddawanych replikacji DNA. Są to kluczowe enzymy polimeryzujące zaangażowane podczas replikacji. Polimeraza DNA jest zdolna do dodawania nukleotydów do wolnego końca 3 'nici DNA, powodując w ten sposób wydłużanie nowej nici. Obecnie, ze względu na rozwój biologii molekularnej w diagnostyce chorób i zastosowaniach przemysłowych, ważne jest wytwarzanie polimeraz o różnych korzystnych właściwościach. Zwiększa to dokładność metody i czyni ją szybszą techniką. Polimeraza Phusion i Taq to dwa komercyjnie produkowane termostabilne enzymy polimerazy, które są wykorzystywane w specjalnych zastosowaniach molekularnych. Fuzja jest polimerazą DNA wyizolowaną z Pyrococcus furiosus i jest używana głównie w eksperymentach klonowania w celu zwiększenia wierności. Taq DNA Polymerase jest standardową polimerazą DNA stosowaną w łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) i jest izolowana z bakterii termostabilnych; Thermus aquaticus. Kluczową różnicą między tymi dwoma enzymami jest mikroorganizm źródłowy. Fuzja jest izolowana od ekstremofila Pyrococcus furiosus, podczas gdy polimeraza Taq jest izolowana od termofilu, Thermus aquaticus. Polimeraza Taq jest izolowana z termofilu Thermus aquaticus. Polimeraza Taq jest izolowana z termofilu Thermus aquaticus.
ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowe różnice
2. Co to jest fuzja
3. Co to jest polimeraza Taq
4. Podobieństwa między polimerazą fuzji a polimerazą Taq
5. Porównanie obok siebie - fuzja i polimeraza Taq w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie
Co to jest Phusion?
Polimeraza DNA fuzji jest nową polimerazą wytwarzaną poprzez izolację enzymu z Pyrococcus furiosus, który jest ekstremofilnym archeonem. Te drobnoustroje przebywają w skrajnie wysokich temperaturach, dzięki czemu polimeraza jest wysoce termostabilną polimerazą. Polimeraza fuzji jest stosowana w celu uzyskania wyjątkowej wierności w porównaniu z konwencjonalną termostabilną polimerazą; Polimeraza Taq. Polimeraza fuzji jest zdolna do amplifikacji długich matryc do 7,5 kb genomowego DNA. Optymalna zdolność polimeryzacji polimerazy Phusion wynosi 72 0 C. Phusion jest również stosowany do klonowania produktów do sekwencjonowania, analizy ekspresji i analizy mutacji.
Polimeraza DNA fuzji ma aktywność egzonukleazy 3 '- 5'. Pozwala to na korektę nowo zsyntetyzowanej nici po syntezie. W związku z tym niedopasowanie nukleotydów można łatwo naprawić. W związku z tym ma mniejszy poziom błędu. Ogólne zalety polimerazy Phusion to;
- Extreme Fidelity
- Wysoka prędkość i skrócony czas przedłużenia
- Solidne reakcje i wymaga minimalnej optymalizacji
- Wysoka wydajność
Rysunek 01: Fuzja
Główną wadą polimerazy Fusion jest to, że jest ona hamowana w obecności trifosforanu dezoksyurydyny (dUTP). Gdy w mieszaninie reakcyjnej gromadzą się dUTP, może to hamować działanie polimerazy Phusion. Zapobiega się temu przez traktowanie mieszaniny reakcyjnej dUTPazą przed dodaniem enzymu. Obecnie jako lekarstwo na ten problem stosuje się odporny na dUTP wariant polimerazy Phusion, znany jako Pfu Turbo, zamiast polimerazy Phusion.
Co to jest polimeraza Taq?
Wynalazek polimerazy DNA Taq zrewolucjonizował dziedzinę biologii molekularnej. To rozwiązało poważny problem w amplifikacji DNA. Polimeraza Taq DNA jest termostabilnym enzymem polimerazy wyekstrahowanym i wyizolowanym z termofilnej bakterii Thermus aquaticus. Odkrycie tych enzymów prowadzi do rozwoju PCR. Enzym ten umożliwił zastosowanie reakcji łańcuchowej polimerazy w amplifikacji DNA zamiast tradycyjnych, pracochłonnych technik klonowania. PCR jest obecnie stosowany w diagnostyce molekularnej, rolnictwie i przemyśle, a do tej techniki dodano wiele nowych odmian.
Rysunek 02: Polimeraza Taq
Polimeraza Taq DNA działa w optymalnym zakresie temperatur pomiędzy 72 0 C - 80 0 C. Polimeraza Taq DNA wymaga kofaktora; magnez ze względu na swoją funkcję. Polimeraza Taq nie ma możliwości korekty 3 '- 5', dlatego współczynnik błędów polimerazy Taq DNA jest wysoki w porównaniu z nowszymi typami polimeraz DNA, takimi jak polimeraza Phusion itp. Jednak popularność polimerazy Taq DNA pozostaje to samo na całym świecie ze względu na wygodę i elastyczność enzymu.
Jakie są podobieństwa między polimerazą Phusion i Taq?
- Zarówno polimerazy Phusion, jak i polimerazy Taq są enzymami polimeryzującymi, które są zdolne do dodawania nukleotydów do wolnego końca 3 'nici DNA.
- Zarówno polimerazy Phusion, jak i Taq wymagają sekwencji startera do zainicjowania polimeryzacji.
- Zarówno polimerazy Phusion, jak i Taq są stabilne termicznie.
- Zarówno polimerazy Phusion, jak i Taq są używane w mechanizmach PCR do amplifikacji DNA.
- Podczas dodawania polimerazy do mieszaniny reakcyjnej, zarówno polimerazy Phusion, jak i Taq są dodawane jako ostatnie, aby zapewnić skuteczność enzymu.
- Zarówno polimerazy Phusion, jak i Taq są komercyjnie syntetyzowane do celów eksperymentalnych biologii molekularnej.
- Zarówno polimerazy Phusion, jak i Taq wymagają kofaktora do pełnienia swojej funkcji.
Jaka jest różnica między polimerazą Phusion a Taq?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Polimeraza Phusion vs Taq |
|
| Fuzja jest polimerazą DNA wyizolowaną z Pyrococcus furiosus i jest używana głównie w eksperymentach klonowania w celu zwiększenia wierności. | Taq DNA Polymerase jest standardową polimerazą DNA stosowaną w łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) i jest izolowana z termostabilnej bakterii Thermus aquaticus. |
| Organizm źródłowy | |
| Fuzja jest pozyskiwana z ekstremofilnych archeonów - Pyrococcus furiosus. | Te dzieła literackie obejmują okres od okresu kolonizacji do okresu dekolonizacji. |
| Umiejętność sprawdzania poprawności | |
| Umiejętność czytania korekt 3 '- 5' jest obecna w Phusion. | Polimeraza Taq nie posiada zdolności do sprawdzania 3 '- 5'. |
| wierność | |
| Phusion zapewnia wysoką wierność. | Polimeraza Taq wykazuje niską wierność. |
| Wzmocnienie | |
| Fuzja jest zdolna do amplifikacji długich fragmentów DNA. | Polimeraza Taq jest zdolna do amplifikacji znacznie krótszych fragmentów DNA. |
| Zatrucie dUTP | |
| Działanie fuzji jest hamowane przez dziwną akumulację. | Polimeraza Taq nie jest hamowana przez dUPT. |
Podsumowanie - polimeraza Phusion vs Taq
Polimeraza DNA fuzji i Taq to dwie termostabilne polimerazy stosowane w technikach PCR. Fuzja jest polimerazą wyizolowaną z ekstremofila Pyrococcus furiosus, podczas gdy Taq jest izolowana z termostabilnej bakterii Thermus aquaticus. Odkrycie polimerazy DNA Taq prowadzi do wynalazku PCR. Phusion ma wiele zalet w porównaniu z Taq, dzięki czemu Phusion jest lepszą opcją w produkcji DNA o wysokiej wierności. Jednak polimeraza Taq jest nadal stosowana jako standardowy enzym polimerazy w PCR. Na tym polega różnica między polimerazą Phusion i Taq.
