Kluczowa różnica - membrana nitrocelulozowa vs nylonowa
Blotting jest ważną techniką wykrywania określonych sekwencji DNA, RNA i białek z ich mieszanin w biologii molekularnej. Odbywa się to za pomocą membrany zwanej blot. Istnieją różne techniki blottingu, takie jak blotting północny, południowy i zachodni. Wyboru właściwej membrany do procesu blottingu należy dokonać ostrożnie, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu i niewłaściwemu wykrywaniu. Nitroceluloza, nylon i PVDF to powszechnie stosowane membrany w technikach blottingu. Mają różne cechy. Kluczowa różnica między membraną nitrocelulozową a nylonową polega na tym, że membrany nitrocelulozowe mają wysoki potencjał immobilizacji białek, podczas gdy membrany nylonowe mają wysoki potencjał unieruchamiania kwasu nukleinowego. Jednak oba typy membran są często używane w technikach blottingu.
SPIS TREŚCI
1. Przegląd i kluczowe różnice
2. Co to jest membrana nitrocelulozowa
3. Co to jest membrana nylonowa
4. Porównanie obok siebie - membrana nitroceluloza i nylon
5. Podsumowanie
Co to jest membrana nitrocelulozowa?
Membrana nitrocelulozowa jest powszechnie stosowanym filtrem membranowym w technikach blottingu kwasów nukleinowych i białek. Posiada duży potencjał wiązania białek. W związku z tym błony nitrocelulozowe są szeroko stosowane w technice western blot. Błony nitrocelulozowe są kompatybilne ze wszystkimi technikami hybrydyzacji i wykazują doskonałe zdolności wiązania bez zakłóceń. Membrany nitrocelulozowe mają naturę hydrofilową. Dokonują hydrofilowych interakcji z cząsteczkami i skutecznie unieruchamiają je na membranie. Handlowe membrany nitrocelulozowe są dostępne w dwóch rozmiarach porów: 0,45 i 0,2 µm.
Rysunek 01: Membrana nitrocelulozowa stosowana w western blotting
Co to jest membrana nylonowa?
Membrana nylonowa to kolejny rodzaj komercyjnej membrany stosowanej w technikach blottingu. Jest alternatywnie stosowany z membranami nitrocelulozowymi do blottingu południowego i północnego. Membrany nylonowe są idealne do południowego blottingu niż nitroceluloza ze względu na ich wysokie powinowactwo do wiązania z DNA. Ze względu na kilka unikalnych cech membran nylonowych, naukowcy często używają membran nylonowych do blottingu południowego i północnego zamiast membrany nitrocelulozowej. Membrany nylonowe są również zalecane do usuwania i ponownego sondowania, w przeciwieństwie do nitrocelulozy.
Ryc. 02: Membrana nylonowa używana do południowego blottingu
Jaka jest różnica między membraną nitrocelulozową a nylonową?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Nitroceluloza a membrana nylonowa |
|
| Membrany nitrocelulozowe są kruche. | Membrany nylonowe są mniej kruche. |
| Obsługa | |
| Są trudne w obsłudze. | Są łatwe w obsłudze. |
| Potępienie | |
| Niepodparte membrany nitrocelulozowe są trudne do ponownego sondowania. | Sondowanie jest łatwe dzięki nylonowym membranom. |
| Zgodność z różnymi warunkami przechowywania | |
| Membrany nitrocelulozowe mają mniejszą wytrzymałość, aby wytrzymać różne warunki przechowywania. | Membrany nylonowe lepiej reagują na różne warunki przechowywania. |
| Posługiwać się | |
| Wymagane jest wstępne zwilżenie. | W przypadku membran nylonowych wstępne zwilżanie nie jest wymagane. |
| Charakter hydrofilowy | |
| Membrany nitrocelulozowe są z natury hydrofilowe, ale są mniej hydrofilowe niż membrany nylonowe. | Charakteryzują się silną hydrofilowością. |
| Potencjał unieruchomienia | |
| Błony nitrocelulozowe mają mniejsze powinowactwo do kwasów nukleinowych. Ale ma duże powinowactwo do białek. | Membrany nylonowe mają duży potencjał wiązania z kwasami nukleinowymi niż membrany nitrocelulozowe. |
Podsumowanie - Nitroceluloza a membrana nylonowa
Membrany nitrocelulozowe i nylonowe to specjalne arkusze używane w technice blottingu do odtwarzania wzoru pasm na żelu. Dają możliwość wykrycia określonej sekwencji lub białka z mieszanin poprzez ich immobilizację na membranie. Po unieruchomieniu cząsteczek na membranie można je wykorzystać jako substrat do analizy hybrydyzacji ze znakowanymi sondami. Membrana nitrocelulozowa jest powszechnie stosowana do wykrywania białek w technice western blot ze względu na jej wysokie powinowactwo wiązania z białkami. Membrany nylonowe są często używane do blottingu południowego i północnego. Na tym polega różnica między membraną nitrocelulozową a nylonową.
