Kluczowa różnica - żel nakładany a żel oddzielający
Pojęcia żel w stosie i żel rozdzielający są używane w wyjaśnieniu techniki SDS-PAGE. SDS-PAGE lub elektroforeza w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu to technika laboratoryjna stosowana do rozdzielania cząsteczek białek na podstawie ich masy cząsteczkowej. Teoria stojąca za tą techniką jest taka, że białka o różnych masach cząsteczkowych wykazują różne szybkości migracji; cząsteczki o niskiej masie cząsteczkowej migrują szybciej, podczas gdy cząsteczki o dużej masie cząsteczkowej migrują powoli. Medium do migracji to żel. Istnieją dwa rodzaje żeli, nazywane żelem układającym i żelem rozdzielającym. Kluczowa różnica między żelem układającym a żelem rozdzielającym polega na tym, że pH żelu układającego się w stos wynosi 6,8, podczas gdy pH żelu rozdzielającego wynosi 8,8.
ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest żel w stosie
3. Co to jest żel oddzielający
4. Związek między żelem układanym w stos a żelem oddzielającym
5. Porównanie obok siebie - żel układany w stos a żel oddzielający w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie
Co to jest żel do układania w stosy?
Żel do układania w stos to nisko stężony żel poliakryloamidowy, który jest nakładany na wierzch bardziej stężonego żelu rozdzielającego (żel rozdzielający) w technice SDS-PAGE. Żel nakładający służy do poprawiania rozdzielczości elektroforezy. Rozdzielczość wzrasta z powodu różnicy między stężeniami żelu układającego i rozdzielającego, które mają wpływ na białka w próbce. Ponieważ stężenie poliakryloamidu w żelu układającym jest niskie, wielkość porów jest większa. Pomaga to również w zwiększeniu separacji.
Żel układający jest luźnym żelem poliakryloamidowym z dużymi porami około 7% poliakryloamidu. Te pory nie stanowią znaczącej bariery dla dużych cząsteczek białka. Stąd żel ten nieznacznie wpływa na ruchliwość tych białek. To sprawia, że separacja zależy od ruchliwości i wielkości białek poprzez koncentrację ich pomiędzy dwoma żelami.
Rysunek 01: Żel akrylamidowy z SDS-PAGE
Wartość pH żelu układającego się w stos wynosi 6,8. Jego pH jest kwaśne niż rozdzielanie żelu o 2 jednostki pH. To pH implikuje niższą siłę jonową, stąd wyższy opór elektryczny. To prowokuje mobilność białek niż inne naładowane cząstki obecne w żelu.
Co to jest żel rozdzielający?
Żel rozdzielający lub żel rozdzielający techniki SDS-PAGE jest silnie stężonym żelem poliakryloamidowym, który jest nakładany na wierzch nisko stężonego żelu układającego się w stos. Żel rozdzielający zawiera dużą ilość poliakryloamidu (10%). Wartość pH tego żelu utrzymuje się na poziomie 8,8, co jest wartością wyższą niż w przypadku żelu do układania w stos.
Rysunek 02: Aparat do elektroforezy żelowej
Kiedy cząsteczki białka dotrą do żelu rozdzielającego, migracja tych cząsteczek jest spowolniona, ponieważ żel rozdzielający jest żelem o wysokim stężeniu i niewielkich porach, który może stanowić znaczną barierę dla ruchu cząsteczek białka. To spowolnienie umożliwia powolną migrację innych białek, aby nadrobić zaległości, powodując powstanie wąskiego, skoncentrowanego pasma między dwoma żelami.
Jaki jest związek między żelem nakładanym a żelem rozdzielającym?
W tym samym aparacie używane są oba typy żelu do układania w stos i żelu rozdzielającego
Jaka jest różnica między żelem do nakładania a żelem rozdzielającym?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Żel układający się w stos a żel rozdzielający |
|
| Żel do układania w stos to nisko stężony żel poliakryloamidowy, który jest nakładany na wierzch bardziej stężonego żelu rozdzielającego (żel rozdzielający) w technice SDS-PAGE. | Żel rozdzielający lub żel rozdzielający techniką SDS-PAGE jest silnie stężonym żelem poliakryloamidowym, który jest nakładany na wierzch nisko stężonego żelu układającego się w stos. |
| Umieszczenie | |
| Żel w stosie nakłada się na żel rozdzielający (oddzielający). | Żel oddzielający umieszcza się na dnie pojemnika używanego do elektroforezy żelowej. |
| Stężenie | |
| Stężenie żelu układającego jest wysokie. | Stężenie żelu oddzielającego jest niskie. |
| Zawartość poliakryloamidu | |
| Żel do układania w stos zawiera około 7% poliakryloamidu. | Żel oddzielający zawiera około 10% poliakryloamidu. |
| pH | |
| Wartość pH żelu układającego się w stos wynosi 6,8. | PH żelu rozdzielającego wynosi 8,8. |
| Rozmiar porów | |
| W żelu układającym są obecne duże rozmiary porów. | W żelu oddzielającym występują małe rozmiary porów. |
| Rozkład | |
| Żel układający się w stos daje lepszą rozdzielczość. | Żel rozdzielający daje słabą rozdzielczość. |
Podsumowanie - Żel nakładany a żel rozdzielający
Żel do układania w stos i żel rozdzielający to dwa rodzaje żeli poliakryloamidowych, które pozwalają uzyskać lepszą separację cząsteczek białka w danej próbce. Różnica między żelem układającym się a żelem rozdzielającym polega na tym, że pH żelu układającego się w stos wynosi 6,8, podczas gdy pH żelu rozdzielającego wynosi 8,8.
