Kluczowa różnica - pozioma i pionowa elektroforeza żelowa
Elektroforeza żelowa jest techniką laboratoryjną stosowaną w genetyce do rozdzielania mieszanin zawierających DNA, RNA i inne białka zgodnie z ich ładunkiem i wielkością molekularną. DNA, RNA lub białka, które wymagają oddzielenia w tej metodzie, przepuszczane są przez żel zawierający małe pory. Cząsteczki są przenoszone przez żel przez pole elektryczne. Cząsteczki przechodzą przez pory żelu, a prędkość ruchu jest odwrotnie proporcjonalna do ich odpowiednich długości. Dlatego cząsteczki o niższej wielkości cząsteczkowej będą poruszać się szybciej niż cząsteczki o większej masie cząsteczkowej. Pole elektryczne jest generowane przez różnicę ładunku na dwóch końcach żelu. Jeden koniec zawiera ładunek dodatni, a drugi zawiera ładunek ujemny. Ponieważ cząsteczki DNA i RNA są naładowane ujemnie,będą przyciągane do dodatnio naładowanego końca żelu. Elektroforeza żelowa może mieć dwie różne metody: poziomą elektroforezę żelową i pionową elektroforezę żelową. W poziomej elektroforezie żelowej żel występuje w orientacji poziomej i jest zanurzony w ciągłym buforze, który znajduje się wewnątrz samego pojemnika z żelem. W pionowej elektroforezie żelowej układ buforowy jest zorientowany pionowo i jest nieciągły, z dwiema komorami na górze i na dole, odpowiednio, z katodą i anodą. To jest kluczowa różnica między poziomą i pionową elektroforezą żelową.żel jest ustawiony poziomo i jest zanurzony w ciągłym buforze, który znajduje się wewnątrz samego pudełka z żelem. W pionowej elektroforezie żelowej układ buforowy jest zorientowany pionowo i jest nieciągły, z dwiema komorami na górze i na dole, odpowiednio, z katodą i anodą. To jest kluczowa różnica między poziomą i pionową elektroforezą żelową.żel jest ustawiony poziomo i jest zanurzony w ciągłym buforze, który znajduje się wewnątrz samego pudełka z żelem. W pionowej elektroforezie żelowej układ buforowy jest zorientowany pionowo i jest nieciągły, z dwiema komorami na górze i na dole, odpowiednio, z katodą i anodą. To jest kluczowa różnica między poziomą i pionową elektroforezą żelową.
ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowe różnice
2. Czym jest pozioma elektroforeza żelowa
3. Czym jest pionowa elektroforeza żelowa
4. Podobieństwa między poziomą i pionową elektroforezą żelową
5. Porównanie obok siebie - pozioma i pionowa elektroforeza żelowa w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie
Co to jest pozioma elektroforeza żelowa?
Pozioma elektroforeza żelowa wykorzystuje podstawową teorię do rozdziału cząsteczek DNA, RNA lub białek zgodnie z ich odpowiednią wielkością i ładunkiem cząsteczek. W tej technice żel występuje w orientacji poziomej i jest zanurzony w buforze, który jest ciągły. Żel agarozowy służy do rozdzielenia pojemnika z żelem na dwie komory. Jeden koniec pudełka z żelem zawiera anodę, a drugi koniec zawiera katodę. Po przyłożeniu prądu bufor używany w tej technice umożliwia utworzenie gradientu ładunku. Po nałożeniu ładunku żel ma tendencję do nagrzewania się. Bufor działa również jako chłodziwo, które utrzymuje temperaturę na optymalnym poziomie. Recyrkulacja uruchomionego buforu zapobiega tworzeniu się gradientu pH. Nieciągłego układu buforowego nie można stosować w poziomej elektroforezie żelowej, ponieważ dwa przedziały układu żelowego są połączone z przepływającym buforem. Akrylamid jest używany podczas elektroforezy żelowej do rozdzielania mieszanin białek.
Rysunek 01: Pozioma elektroforeza żelowa
W poziomej elektroforezie żelowej akrylamid nie może być stosowany, ponieważ pojemnik z żelem jest wystawiony na działanie tlenu. Obecność tlenu powoduje zahamowanie polimeryzacji akryloamidu, co przeszkadza w tworzeniu się żelu. Pozioma elektroforeza żelowa to łatwa metoda, która jest wykorzystywana do rozdzielania DNA i RNA.
Co to jest pionowa elektroforeza żelowa?
Technika pionowej elektroforezy żelowej działa zgodnie z podstawową teorią elektroforezy żelowej, ale uważa się ją za bardziej złożoną niż metoda poziomej elektroforezy żelowej. Ta technika wykorzystuje nieciągły bufor. Katoda znajduje się w górnej komorze, a anoda w dolnej komorze. Elektrody obecne w każdym przedziale zapewniają wymagane pole elektryczne. Cienką warstwę żelu wlewa się między dwie zamontowane szklane płytki. Dlatego też górna część żelu jest zanurzona w górnej komorze, a dolna część żelu jest zanurzona w komorze na dole. Po doprowadzeniu prądu niewielka część bufora przesuwa się do dolnej komory z górnej komory przez żel. Prąd stosowany w tej technice to jednostki minutowe.
Rysunek 02: Pionowa elektroforeza żelowa
W przypadku pionowej elektroforezy żelowej bufor przepływa tylko przez żel. Pozwala to na dokładną kontrolę gradientu napięcia podczas etapu separacji. Można stosować żel akrylamidowy, ponieważ komory nie są wystawione na działanie tlenu atmosferycznego. Ze względu na mniejszy rozmiar porów żelu akryloamidowego można uzyskać dokładną separację przy wyższej rozdzielczości.
Jakie są podobieństwa między poziomą i pionową elektroforezą żelową?
- Oba systemy działają zgodnie z podstawową teorią elektroforezy żelowej.
- Do zapewnienia wymaganego pola elektrycznego w obu systemach zastosowano anodę i katodę.
Jaka jest różnica między poziomą a pionową elektroforezą żelową?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Pozioma i pionowa elektroforeza żelowa |
|
| Pozioma elektroforeza żelowa to technika elektroforezy żelowej, w której żel występuje w orientacji poziomej. | Pionowa elektroforeza żelowa to technika elektroforezy żelowej, w której żel jest zorientowany pionowo. |
| Bufor | |
| Pozioma elektroforeza żelowa obejmuje ciągły bufor. | Bufor roboczy jest nieciągły w pionowej elektroforezie żelowej. |
| Stosowanie akrylamidu | |
| Akrylamidu nie można stosować do poziomej elektroforezy żelowej, ponieważ pojemnik z żelem jest wystawiony na działanie tlenu atmosferycznego. | Ponieważ żel nie jest wystawiony na działanie tlenu atmosferycznego dzięki dwóm oddzielnym komorom, akrylamid można wykorzystać do pionowej elektroforezy żelowej. |
| Funkcjonować | |
| Pozioma elektroforeza żelowa jest częściej stosowana do rozdzielania mieszanin DNA i RNA, ale nie białek. | Do rozdzielania mieszanin białek stosuje się pionową elektroforezę żelową. |
Podsumowanie - pozioma i pionowa elektroforeza żelowa
Elektroforeza żelowa jest techniką laboratoryjną, która jest szeroko stosowana do rozdzielania mieszanin zawierających cząsteczki DNA, RNA i białek. Istnieją dwie metody elektroforezy żelowej: pozioma i pionowa elektroforeza żelowa. W poziomej elektroforezie żelowej przepływający bufor jest ciągły, podczas gdy w pionowej elektroforezie żelowej jest nieciągły. Jest to różnica między poziomą i pionową elektroforezą żelową. Oba systemy działają według wspólnej zasady elektroforezy żelowej.
Pobierz wersję PDF poziomej i pionowej elektroforezy żelowej
Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać jej w trybie offline, zgodnie z notą cytowania. Proszę pobrać wersję PDF tutaj Różnica między poziomą i pionową elektroforezą żelową.
