Kluczowa różnica - YAC vs wektory BAC
Wektory są używane w klonowaniu molekularnym. Wektor można zdefiniować jako cząsteczkę DNA, która zachowuje się jak nośnik do przenoszenia obcego materiału genetycznego do innej komórki. Wektor zawierający obce DNA jest znany jako rekombinowany DNA i powinien mieć zdolność replikacji i ekspresji go w organizmie gospodarza. Sztuczny chromosom drożdżowy (YAC) i sztuczny chromosom bakteryjny (BAC) to dwa typy wektorów biorących udział w klonowaniu. Kluczowa różnica między YAC i BAC polega na tym, że YAC jest sztucznie skonstruowanym systemem wektorów wykorzystującym określony region chromosomu drożdży do wstawiania dużych segmentów materiału genetycznego do komórek drożdży, podczas gdy BAC jest sztucznie skonstruowanym systemem wektorów wykorzystującym określony region chromosomu E. coli. do wstawiania dużych segmentów DNA do komórek E. coli.
SPIS TREŚCI
1. Przegląd i kluczowe różnice
2. Czym są wektory YAC
3. Co to są wektory BAC
4. Porównanie obok siebie - wektory YAC vs BAC
5. Podsumowanie
Co to są wektory YAC?
YAC (sztuczny chromosom drożdży) jest sztucznie zbudowanym chromosomem, który ma zdolność przenoszenia dużego segmentu obcego DNA i replikacji w komórkach drożdży. Ma centromer, telomery oraz sekwencje replikujące się autonomicznie, które są niezbędne do replikacji i stabilności. YAC powinien również zawierać marker lub markery selektywne i miejsca restrykcyjne, aby uczynić go skutecznym wektorem do klonowania. Do YAC można wstawić dużą sekwencję w zakresie od 1000 kb do 2000 kb i przenieść do drożdży. Wydajność transformacji YAC jest bardzo niska.
Rysunek 01: YAC Vector
Co to są wektory BAC?
Sztuczny chromosom bakteryjny (BAC) to sztucznie skonstruowany chromosom do klonowania molekularnego. Ma określone regiony plazmidu E. coli F i jest kolisty i super zwinięty. BAC został opracowany w celu klonowania fragmentów DNA do bakterii, zwłaszcza do E. coli. Może zawierać fragmenty DNA o wielkości do 300 kb. W porównaniu do YAC, wkładki do klonowania BAC mają mniejsze rozmiary. BAC zostały opracowane w 1992 roku i nadal są popularne ze względu na swoją stabilność i łatwość budowy. BAC są również przydatne w opracowywaniu szczepionek.
Rysunek 02: Wektor BAC w klonowaniu molekularnym
Jaka jest różnica między wektorami YAC i BAC?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Wektory YAC vs BAC |
|
| YAC jest chromosomem zmodyfikowanym genetycznie z wykorzystaniem DNA drożdży do klonowania. | BAC to genetycznie zmodyfikowana cząsteczka DNA wykorzystująca DNA E. coli do celów klonowania. |
| Płeć | |
| YAC zaprojektowano do klonowania dużych fragmentów genomowego DNA w drożdżach. | BAC opracowano do klonowania dużych fragmentów genomowych w Escherichia coli. |
| Długość wkładki | |
| YAC mogą zawierać wstawki genomowe wielkości megazasad. (1000 kb - 2000 kb). | BAC mogą przenosić wstawki o wielkości 200–300 kb lub mniejszej. |
| Budowa | |
| DNA YAC jest trudne do oczyszczenia w stanie nienaruszonym i wymaga wysokiego stężenia do wytworzenia układu wektorów YAC. | BAC jest łatwy do oczyszczenia w stanie nienaruszonym i można go łatwo skonstruować. |
| Chimeryzm | |
| YAC są często chimeryczne. | BAC rzadko są chimeryczne. |
| Stabilność | |
| YAC jest niestabilny. | BAC jest stabilny. |
| Modyfikacje | |
| Rekombinacja drożdży jest bardzo możliwa i zawsze pozostaje aktywna. W związku z tym może generować delecje i inne przegrupowania w YAC. | Zapobiega się rekombinacji E. coli i jest włączana w razie potrzeby. W związku z tym zmniejsza niepożądane przegrupowania w BAC. |
| Konserwacja | |
| Manipulowanie zrekombinowanymi YAC zwykle wymaga przeniesienia YAC do E. coli w celu późniejszej manipulacji. Dlatego jest to pracochłonny proces. | Modyfikacja BAC zachodzi bezpośrednio w E. coli. Nie ma więc potrzeby przenoszenia DNA. Dlatego proces ten nie jest pracochłonny. |
Podsumowanie - YAC vs wektory BAC
YAC stał się podstawowym narzędziem badawczym w procesach klonowania ze względu na jego zdolność do klonowania dużych fragmentów DNA w organizmie gospodarza. Jednak YAC mają kilka wad jako wektory, takich jak trudności konstrukcyjne, chimeryzm, niestabilność itp. Dlatego, aby przezwyciężyć te problemy, naukowcy opracowali wektory BAC. BAC został skonstruowany przy użyciu określonych regionów chromosomu E. coli. Jest to stabilny wektor i można go łatwo skonstruować. Jednak długość DNA, z którym może sobie poradzić BAC, jest do 20 razy mniejsza niż w przypadku YAC. To jest różnica między systemami wektorów YAC i BAC. Obecnie w laboratoriach BAC jest bardziej preferowany niż YAC.
