Kluczowa różnica - HPLC vs HPTLC
Kluczowa różnica między HPLC i HPTLC polega na tym, że HPLC umożliwia ilościowe rozdzielenie składników w próbce, podczas gdy HPTLC nie pozwala na ilościowe rozdzielenie składników w próbce.
Chromatografia to metoda fizycznego rozdzielania stosowana do oddzielania i identyfikacji składników mieszaniny. Zarówno HPLC, jak i HPTLC to techniki chromatograficzne. HPLC to wysokosprawna chromatografia cieczowa. HPTLC to wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa.
ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i główne różnice
2. Co to jest HPLC
3. Co to jest HPTLC
4. Porównanie bezpośrednie - HPLC vs HPTLC w formie tabelarycznej
5. Podsumowanie
Co to jest HPLC?
HPLC to wysokosprawna chromatografia cieczowa. Jest to technika analityczna stosowana do rozdzielania, identyfikacji i ilościowego określania składników mieszaniny. W tej technice próbkę rozpuszcza się w odpowiednim rozpuszczalniku. Następnie rozpuszczalnik wraz z próbką przepuszczany jest przez pompę o zadanym ciśnieniu. Pompa jest wypełniona stałym materiałem adsorbującym. Wówczas niektóre składniki silnie wiążą się z materiałem chłonnym, a inne luźno. To powoduje, że komponenty mają różne natężenia przepływu przez pompę. Dzięki temu komponenty można łatwo rozdzielić.
Rysunek 01: System HPLC
Materiał adsorbujący wypełniający pompę nazywany jest fazą stacjonarną. Rozpuszczalnik z rozpuszczoną próbką jest nazywany fazą ruchomą. Pompa używana w tej technice nazywana jest kolumną. Kolumna jest wypełniona adsorbentem, najczęściej cząsteczkami krzemionki. Rozmiar tych cząstek może wynosić od 2 do 50 µm. Na proces separacji ma wpływ skład fazy ruchomej i temperatura systemu. Interakcje między fazą stacjonarną a składnikiem próbki mogą być interakcjami hydrofobowymi, dipolowo-dipolowymi, wiązaniami jonowymi itp.
Ciśnienie robocze HPLC jest znacznie wyższe niż w tradycyjnej chromatografii cieczowej. Leży około 50-350 barów. Różnica między chromatografią cieczową a HPLC polega na tym, że w chromatografii cieczowej próbka przechodzi przez kolumnę pod wpływem grawitacji, podczas gdy w HPLC próbka jest poddawana ciśnieniu przez kolumnę. Rozmiar kolumny i cząsteczek absorbentu są również bardzo małe w porównaniu z tradycyjną chromatografią cieczową. Jednak rozdzielczość podana przez technikę HPLC jest lepsza.
Co to jest HPTLC?
HPTLC to wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa. Jest to zaawansowana i zautomatyzowana forma tradycyjnej analizy TLC. Ta technika zapewnia wydajną rozdzielczość w krótkim czasie. W tej metodzie analizy próbka i wzorzec mogą być analizowane w tym samym czasie, co pozwala na porównanie próbki z wzorcem. Daje lepszą dokładność analityczną niż inne techniki chromatograficzne. Czas potrzebny na analizę jest krótszy. Technika jest techniką niskokosztową.
Rysunek 02: Analiza barwników spożywczych przy użyciu HPTLC
Metoda HPTLC jest prostym procesem, eliminuje się również etap przygotowania próbki (w tradycyjnej TLC etap przygotowania próbki jest wykonywany przed separacją. Ten etap obejmuje czyszczenie i wzbogacanie). Rozpuszczalnik można stosować bezpośrednio, bez jakiejkolwiek obróbki wstępnej, chociaż inne techniki chromatograficzne wymagają wstępnej obróbki, takiej jak odgazowanie, filtracja itp.
Adsorbent stosowany w HPTLC to krzemionka o bardzo małych rozmiarach cząstek. W tradycyjnej TLC wielkość cząstek krzemionki wynosi 5-20 μm, podczas gdy w HPTLC 4-8 μm. Próbkę nakłada się na płytkę HPTLC za pomocą aplikatora. Daje jednolitą i bezpieczną aplikację. Następnie płytki są umieszczane w komorze posiadającej fazę ruchomą. Komora powinna być nasycona parą fazy ruchomej. Po zakończeniu procesu HPTLC można wykryć przesunięte miejsca. Podczas wykrywania plam na płytce technika HPTLC wykorzystuje odpowiedni region UV lub komorę jodową.
Jaka jest różnica między HPLC a HPTLC?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC to wysokosprawna chromatografia cieczowa. | HPTLC to wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa. |
| Technika | |
| W HPLC fazę ruchomą z rozpuszczalnikiem przepuszcza się przez kolumnę wypełnioną fazą stacjonarną. | W HPTLC próbkę nanosi się na płytkę TLC i umieszcza w komorze zawierającej fazę ruchomą; następnie próbka może migrować w górę płytki wraz z fazą ruchomą. |
| Pomiary | |
| W HPLC różnice między szybkościami przepływu składników przez kolumnę są wykorzystywane do oddzielenia składników w próbce. | W HPTLC różnice między odległościami pokonywanymi przez każdy składnik w próbce są wykorzystywane do oddzielenia składników w próbce. |
| Separacja ilościowa | |
| HPLC umożliwia ilościowe rozdzielenie składników próbki. | HPTLC nie pozwala na ilościowe rozdzielenie składników w próbce. |
Podsumowanie - HPLC vs HPTLC
HPLC i HPTLC to dwie techniki chromatograficzne. Kluczowa różnica między HPLC i HPTLC polega na tym, że HPLC umożliwia ilościowe rozdzielenie składników w próbce, podczas gdy HPTLC nie pozwala na ilościowe rozdzielenie składników w próbce.
