Kluczowa różnica - bezpośredni vs pośredni test ELISA
Test immunoenzymatyczny (ELISA), znany również jako test immunoenzymatyczny, to test serologiczny wykrywający przeciwciała we krwi. Służy jako narzędzie diagnostyczne, aby dowiedzieć się, czy pacjent był narażony na określony typ wirusa lub inny czynnik zakaźny (antygen) i czy organizm wytworzył przeciwciała przeciwko infekcji. ELISA może również zidentyfikować przeszłe i obecne infekcje. Dlatego też ELISA jest często stosowana przez lekarzy jako badanie przesiewowe przed dogłębną analizą chorób. Ten test można wykonać w laboratorium, pobierając próbkę krwi od pacjenta. Istnieją dwa rodzaje testów ELISA: bezpośredni ELISA i pośredni ELISA. Kluczowa różnica między bezpośrednim i pośrednim testem ELISA polega na tym, że pośredni test ELISA jest bardziej czuły i wymaga dodania drugorzędowego przeciwciała, podczas gdy bezpośredni test ELISA jest mniej czuły i wykorzystuje tylko przeciwciało pierwotne.
SPIS TREŚCI
1. Przegląd i kluczowe różnice
2. Co to jest bezpośredni test ELISA
3. Co to jest pośredni test ELISA
4. Bezpośrednie porównanie - bezpośredni i pośredni test ELISA
5. Podsumowanie
Co to jest bezpośredni test ELISA?
ELISA to test diagnostyczny choroby wykonywany w celu wykrycia obecności określonych antygenów lub przeciwciał we krwi. Odbywa się to jako test na płytce. Wykorzystuje przeciwciała połączone z łatwymi do oznaczenia enzymami. Obecność antygenów w próbce surowicy wiąże się ze specyficznymi przeciwciałami połączonymi z enzymami. Na ostatnim etapie dodaje się specyficzny substrat w celu przereagowania z enzymem. Enzym przekształca substrat w produkt barwny lub wytwarzający sygnał. Zmiana koloru substratu chemicznego wskazuje na obecność określonego przeciwciała w próbce surowicy. Bezpośredni test ELISA wykorzystuje tylko pierwszorzędowe przeciwciało połączone z enzymem. Po związaniu się z antygenem szybko zmienia kolor, wskazując na obecność czynnika zakaźnego we krwi. Jednak,intensywność sygnałów jest słabsza w bezpośrednim teście ELISA, ponieważ epitopy są ograniczone do wiązania antygenów. Dlatego bezpośredni test ELISA jest mniej czuły w porównaniu z pośrednim ELISA.
Rysunek 01: Bezpośredni test ELISA
Co to jest pośredni test ELISA?
ELISA można przeprowadzić przy użyciu dwóch typów przeciwciał, a mianowicie; przeciwciało pierwotne i przeciwciało wtórne. Narzędzie pośredniego testu ELISA wykorzystuje oba typy przeciwciał do wzmacniania sygnałów w celu lepszego wykrywania. Pośrednią technikę ELISA przeprowadza się w następujący sposób.
- Płytki inkubuje się z antygenami i przemywa w celu zablokowania niespecyficznego wiązania.
- Następnie dodaje się i przemywa pierwotne przeciwciała.
- Dodaje się i przemywa przeciwciało wtórne połączone z enzymem.
- Dodaje się substrat i pozostawia do przereagowania z enzymami.
- Sygnały są wykrywane, a obecność lub brak określonego antygenu w próbce jest identyfikowana.
W pośrednim teście ELISA kilka przeciwciał drugorzędowych może wiązać się z jednym przeciwciałem pierwszorzędowym. Wtórne przeciwciała są połączone z łatwymi do oznaczenia enzymami. Dlatego jedno wiązanie może generować silny sygnał z powodu więcej niż jednej interakcji. Dlatego pośredni test ELISA jest bardziej czuły niż bezpośredni ELISA. Jednak pośredni test ELISA może dawać niespecyficzne sygnały z powodu reakcji krzyżowych przeciwciał drugorzędowych.
Rysunek 02: Pośredni test ELISA
Jaka jest różnica między bezpośrednim a pośrednim testem ELISA?
Porównaj środek artykułu przed tabelą
Bezpośredni vs pośredni test ELISA |
|
| Bezpośredni test ELISA jest mniej czuły w porównaniu z pośrednim ELISA. | Pośredni test ELISA jest bardziej czuły. |
| Zajęty czas | |
| Bezpośredni test ELISA to szybki proces. | Pośredni test ELISA jest czasochłonny. |
| Stosowanie przeciwciał | |
| Tylko jeden typ przeciwciał (przeciwciała pierwotne) jest używany w bezpośrednim teście ELISA. | Pierwotne i drugorzędowe przeciwciała są używane do pośredniego testu ELISA. |
| Powiązanie z enzymami | |
| Pierwotne przeciwciała są połączone z enzymami. | Wtórne przeciwciała są połączone z enzymami. |
| Reaktywność krzyżowa drugich przeciwciał | |
| Bezpośredni test ELISA eliminuje reaktywność krzyżową drugich przeciwciał. | Na pośredni test ELISA wpływa reaktywność krzyżowa drugich przeciwciał. |
| Sygnały | |
| Sygnały są słabe w porównaniu z pośrednim testem ELISA. | Sygnały są wzmacniane w pośrednim teście ELISA. Dlatego jest łatwy do wykrycia. |
Podsumowanie - test ELISA bezpośredni vs pośredni
ELISA to technika biochemiczna stosowana głównie w immunologii do wykrywania obecności przeciwciała lub antygenu w próbce krwi pacjenta. Można to przeprowadzić za pomocą dwóch procesów znanych jako bezpośredni lub pośredni test ELISA. Bezpośredni test ELISA wykorzystuje tylko pierwotne przeciwciała do wykrywania antygenu, podczas gdy pośredni ELISA wykorzystuje zarówno pierwotne, jak i wtórne przeciwciała. W bezpośrednim teście ELISA pierwotne przeciwciała są znakowane, podczas gdy w pośrednim ELISA drugorzędowe przeciwciała są znakowane. Na tym polega różnica między bezpośrednim a pośrednim testem ELISA.
